RAR CALUX® (BDS 012)

レチノイン酸応答性(RAR)CALUX®は、ヒト骨肉腫細胞株U2OSを使用し、レチノイドおよびレチノイド様化合物の存在を検出するためのレポーター遺伝子としてレチノイン酸応答性要素(RARE)に結合したホタルのルシフェラーゼ遺伝子を組み込んでいます。これらの化合物が細胞内のレチノイン酸受容体に結合すると、リガンド-受容体複合体がRAREに結合します。これにより、通常はRARE媒介の転写に関連するタンパク質が発現し、ルシフェラーゼも発現します。適切な基質をルシフェラーゼに追加すると、光が放出されます。生成される光の量は、リガンド特異的受容体活性化の量に比例しており、関連する参照化合物レチノイン酸(RA)に対してベンチマークされ、毒性等価(TEQ)またはバイオアナリティカル等価(BEQ)として表現されます。

仕様RAR CALUX®
基底細胞株U2OS
ヒト
組織骨肉腫
陽性対照トリヨードチロニン(T3)
エンドポイント(純粋化合物)ECまたはPC濃度、最小効果濃度(例:PC10)
エンドポイント(混合物)毒性当量(pg TEQ/g処理サンプル)
テスト期間24時間(インキュベーション時間)
特異性RARにのみ結合します。リガンドの選択は、化合物クラス選択的検査法および/または代謝モジュールを通じて行うことができます。
アッセイ干渉非常に経路特異性の高いコンストラクトと特異的な受容体コンストラクト、および広範なQA/QCを使用しているため、最小限です。特定のリガンドで稀に発生する細胞毒性および非特異的ルシフェラーゼ干渉は、cytotox CALUX®アッセイで評価できます。
感度(LOD/Q)通常、高pgの範囲(マトリックスとサンプルサイズに依存)
変動制……………
Z係数……………
マトリックスあらゆるタイプのサンプル
サンプルの体積/質量マトリックスおよび所望の(定量限界)LOQに依存
化合物の量通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低い。
評価基準関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。
SOPとガイドラインBDS内部、ERおよびAR CALUX®アッセイに類似
HTSプロトコルBDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順
主な参考文献Piersma AH, Schulpen SHW, Uibel F, Van Vugt-Lussenburg, B, Bosgra S, Hermsen SAB, Roelofs MJE, Man, H.,Jonker, L., Van der Linden, S, Van Duursen MBM, Wolterbeek APM, Schwarz M, Kroese ED, Van der Burg B. (2013) Evaluation of an alternative in vitro test battery for detecting reproductive toxicants. Reprod. Toxicol. 38,53-64.

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