a highly purified recombinant Taq DNA Polymerase
PCRBIO Classic Taq PCRBIO Classic Taq は、ジェノタイピング、スクリーニング、ライブラリー構築など、日常のあらゆる PCR アプリケーションに使用できる高度に精製された組換え Taq DNA ポリメラーゼです。
酵素とバッファー システムにより、哺乳動物のゲノム DNA などの複雑なテンプレートに対して優れた PCR パフォーマンスが可能になります。
最大 6kb のアンプリコンによる PCR 成功率の向上
高度なバッファー化学 ： 30mM MgCl2 を含む 10x バッファーが付属
標準および高速 PCR 条件下で高収量
GC リッチおよび AT リッチ配列を含む複雑なテンプレートからの効率的かつ特異的な増幅
ルーチンアプリケーションPCR
TAクローニング
メチル化された DNA
標準および高速 PCR
PCRBIO HiFi Polymerase とは？ PCRBIO Classic Taq は、ジェノタイピング、スクリーニング、ライブラリ構築など、日常のあらゆる PCR アプリケーションに適した強力な酵素です。酵素とバッファー システムにより、PCR の速度、収量、特異性が向上し、哺乳類ゲノム DNA などの複雑なテンプレートで優れたパフォーマンスを発揮します。PCRBIO Classic Taq は、GC と AT リッチの両方を含む幅広いテンプレートで一貫して優れたパフォーマンスを発揮します。
酵素には、30mM MgCl2 を含む 10x バッファーが付属しています。生成された PCR 産物は A テールであり、TA クローニング ベクターにクローニングできます。
PCRBIO Classic Taq
アッセイに特殊なバッファーが必要な場合、PCRBIO Classic Taq を使用できますか？
PCRBIO Classic Taq に付属する 10x PCRBIO HiFi Buffer は、この酵素専用に開発されたものであり、併用することを強くお勧めします。ただし、PCRBIO Classic Taq は、野生型 Taq で使用するために開発されたあらゆる PCR バッファーと互換性があります。PCRBIO Classic Taq でカスタマイズしたバッファーを使用する場合は、アニーリング温度や酵素、テンプレート、dNTP、MgCl2 の濃度などの反応パラメータの最適化が必要になる可能性があることに留意してください。
PCRBIO Classic Taq はコロニー PCR に使用できますか？
はい。細菌コロニーを使用する場合は、滅菌チップを使用してコロニーを選択し、50 µL の PCR 反応液に再懸濁します。液体培養から作業している場合は、最終混合物に 5 µL の一晩培養液を追加します。一般的なプロトコルに従い、最初の変性時間を 95 °C で 10 分に増やします。
PCRBIO Classic Taq は血液サンプルからの DNA の増幅に使用できますか？
はい。2 µL の血液サンプルを 50 µL の PCR 反応に使用し、一般的なプロトコルに従ってください。血液成分によって PCR 反応が阻害される可能性があることに注意してください。PCR 増幅に最適なテンプレート濃度を見つけるために、サンプルの段階希釈を実行してください。
PCRBIO HiFi Polymerase は校正できますか？
いいえ。PCRBIO Classic Taq には 5’-3’ エキソヌクレアーゼ活性がありますが、3’-5’ エキソヌクレアーゼ (校正) 活性はありません。
PCRBIO Classic Taq は PCR 産物に A テールまたは平滑末端を生成しますか？
PCRBIO Classic Taqで生成されたPCR産物はAテール化されており、TAベクターへのクローニングに適しています。詳細については文献[1]を参照してください。
Yao, S., Hart, D. J. & An, Y. Recent advances in universal TA cloning methods for use in function studies. Protein Eng Des Sel , doi:10.1093/protein/gzw047 (2016).
私の結果には、非特異的なアンプリコンやスメアのバックグラウンドが多く含まれています。トラブルシューティングについて何かアドバイスはありますか？
スメアが懸念される場合は、それが最適ではない条件でアガロースゲル電気泳動を実行したことによるアーティファクトではないことを確認することをお勧めします。最適ではない条件には、高電圧やゲルが固まるのに十分な時間を与えないことが含まれます[1]。
また、PCR 反応のトラブルシューティングを行い、以下の提案を検討する必要がある場合もあります [2]。
プライマーは、プライマー間の相互作用を防ぎ、特異性を向上させるように設計する必要があります
アニーリング温度を上げるか、アニーリング温度勾配 PCR を実施して最適なアニーリング温度を決定します
反応中のテンプレートの量を減らします。高品質の DNA を得るには、50 µL 反応あたり 1 ～ 100 ng のゲノム DNA または 5 ng 以下のプラスミド / ラムダ DNA を使用します
サイクル数を減らします
反応あたりの酵素量を減らします
プライマー濃度を下げますが、各プライマーの濃度は 100 nM 以上にしてください
最終濃度が 5% ～ 10% になるように反応液に DMSO を含めます
Koontz, L. Agarose Gel Electrophoresis. Laboratory methods in enzymology : DNA . First edition. edn, Vol. 529 35-45 (2013).
Lorenz, T. C. Polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies. J Vis Exp , e3998, doi:10.3791/3998 (2012).
私の結果では、収率が非常に低いことがわかりました。トラブルシューティングについて何かアドバイスはありますか？
以下の提案を検討し、文献[1]も参照するとよいでしょう。
アニーリング温度勾配 PCR におけるアニーリング温度を最適化します
反応中のテンプレートの量を増やしてください
サイクル数を増やしてください
反応あたりの酵素の量を増やします
プライマー濃度を増やしますが、各プライマーの濃度が 1 μM を超えないようにしてください
新鮮なdNTP溶液を試してください
MgCl2 を最適化します
Lorenz, T. C. Polymerase chain reaction: basic protocol plus troubleshooting and optimization strategies. J Vis Exp , e3998, doi:10.3791/3998 (2012).
PCRBIO Classic Taq の保管に関する推奨事項は何ですか？
キットは到着後、-20°C で保管してください。長時間光にさらさないでください。正しく保管されていれば、キットは 12 か月間完全な活性を保持します。このキットは 4℃で 1 か月間保存できます。
PCRBIO Classic Taq と PCRBIO Taq DNA Polymerase の違いは何ですか？
PCRBIO Classic Taq 酵素には、10x PCRBIO Classic バッファーが付属しており、バッファーには 30 mM MgCl2 が含まれています。dNTP は別売りで、最終反応に追加する必要があります。PCRBIO Taq DNA Polymerase には、5x PCRBIO 反応バッファーが付属しており、バッファーには MgCl2 と dNTP の両方が含まれています。さらに、PCRBIO Taq DNA Polymerase は、アガロース ゲルに直接ロードするための赤色色素の有無にかかわらず、さらに便利な 2x ミックスとしてご利用いただけます。
PCRBIO Ultra Polymerase のエラー率はどれくらいですか？
この酵素のエラー率は、取り込まれたヌクレオチド 2.0 x 10⁵ あたり約 1 個のエラーです。
PCRBIO Ultra Polymerase の推奨伸長時間はどれくらいですか？
1 kb ～ 6 kb のアンプリコンを含む真核生物 DNA からの増幅には 1 キロベース (kb) あたり 15 秒かかります。アンプリコンが短い場合は、1 秒の延長で十分です。
