PAH CALUX® (BDS 004)
ポリハロゲン化炭化水素（PAH）応答性のPAH CALUX®は、ラット肝腫瘍細胞株H4IIEを使用し、発癌性PAHsの存在を検出するためのレポーター遺伝子としてダイオキシン応答性要素（DRE）に結合したホタルのルシフェラーゼ遺伝子を組み込んでいます。これらの化合物が細胞内のアリールハイドロカーボン受容体（AhR）に結合すると、リガンド-受容体複合体がDREに結合します。これにより、通常はDRE媒介の転写に関連するタンパク質が発現し、ルシフェラーゼも発現します。適切な基質をルシフェラーゼに追加すると、光が放出されます。生成される光の量は、リガンド特異的受容体活性化の量に比例しており、関連する参照化合物ベンゾ(a)ピレン（BaP）に対してベンチマークされ、毒性等価（TEQ）またはバイオアナリティカル等価（BEQ）として表現されます。特定のレポーター遺伝子構造、選択的な処理およびバイオ分析プロトコルの使用を通じて、PAHの選択性が得られます。
| 仕様 | PAH CALUX® |
| 基底細胞株 | H4IIE |
| 種 | ラット |
| 組織 | 肝細胞癌 |
| 陽性対照 | ベンゾ(a)ピレン (BaP) |
| エンドポイント（純粋化合物） | ECまたはPC濃度、最小効果濃度（例：PC10） |
| エンドポイント（混合物） | 毒性当量（pg TEQ/g処理サンプル） |
| テスト期間 | 6時間（インキュベーション時間） |
| 特異性 | 特定の後処理方法と短いインキュベーション時間によるAhRへの結合は、通常PAHのみによって行われます。 |
| アッセイ干渉 | 経路特異性の高いコンストラクトと広範な QA/QC を使用しているため、最小限です。細胞毒性はチェックされていますが、まれにしか発生しません。 |
| 感度（LOD/Q） | 通常、pgの範囲（マトリックスとサンプルサイズに依存） |
| 変動制 | …………… |
| Z係数 | …………… |
| マトリックス | あらゆるタイプのサンプル |
| サンプルの体積/質量 | マトリックスおよび所望の（定量限界）LOQに依存 |
| 化合物の量 | 通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低い。 |
| 評価基準 | 関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。 |
| SOPとガイドライン | BDS内部およびEURL‑ECVAMメソッドDB‑ALMプロトコル番号197: 自動化されたCALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順。 |
| HTSプロトコル | BDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順 |
| 主な参考文献 | Pieterse B, Felzel E, Winter R, van der Burg B, Brouwer A (2013) PAH-CALUX, an optimized bioassay for carcinogenic hazard identification of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) as individual compounds and in complex mixtures. Environ Sci Technol, 47, 11651-11659. |