NFkappaB CALUX® (BDS 018)

NFkappaB応答性CALUX®は、NFkappaB経路を活性化するリガンドの存在をレポーター遺伝子としてNFkappaB応答性要素(NFkappaB REs)に結合したホタルルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだヒト骨肉腫細胞株U2OSを使用しています。これらの化合物によってNFkappaB経路が活性化されると、NFkappaBがNFkappaB REsに結合します。これにより、通常はNFkappaB REs媒介の転写に関連するタンパク質が発現し、ルシフェラーゼも発現します。適切な基質をルシフェラーゼに追加すると、光が放出されます。生成される光の量はリガンド特異的経路活性化の量に比例しており、関連する参照化合物である経路アゴニスト、インターロイキン-1または12-O-テトラデカノイルホルボール13-アセタート(TPA)に対してベンチマークされ、毒性等価(TEQ)またはバイオアナリティカル等価(BEQ)として表現されます。

仕様NFkappaB CALUX®
基底細胞株U2OS
ヒト
組織骨肉腫
陽性対照インターロイキン‑1または12‑O‑テトラデカノイルホルボール13‑酢酸塩(TPA)
エンドポイント(純粋化合物)ECまたはPC濃度、最小効果濃度(例:PC10)
エンドポイント(混合物)毒性当量(pg TEQ/g処理サンプル)
テスト期間24時間(インキュベーション時間)
特異性NFkappaB経路のみを活性化します。リガンドの選択は、化合物クラス選択的検査法および/または代謝モジュールを通じて行うことができます。
アッセイ干渉非常に経路特異性の高いコンストラクトと特異的な受容体コンストラクト、および広範なQA/QCを使用しているため、最小限です。特定のリガンドで稀に発生する細胞毒性および非特異的ルシフェラーゼ干渉は、cytotox CALUX®アッセイで評価できます。
感度(LOD/Q)通常、高pgの範囲(マトリックスとサンプルサイズに依存)
変動制……………
Z係数……………
マトリックスあらゆるタイプのサンプル
サンプルの体積/質量マトリックスおよび所望の(定量限界)LOQに依存
化合物の量通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低い。
評価基準関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。
SOPとガイドラインBDS内部、ERおよびAR CALUX®アッセイに類似
HTSプロトコルBDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順
主な参考文献Piersma AH, Schulpen SHW, Uibel F, Van Vugt-Lussenburg, B, Bosgra S, Hermsen SAB, Roelofs MJE, Man, H., Jonker, L., Van der Linden, S, Van Duursen MBM, Wolterbeek APM, Schwarz M, Kroese ED, Van der Burg B. (2013) Evaluation of an alternative in vitro test battery for detecting reproductive toxicants. Reprod. Toxicol. 38,53-64.

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