IsoFast® Bst Polymerase
IsoFast® Bst Polymerase は、5′-3′ ポリメラーゼ活性と鎖置換活性を含む、Bst DNA ポリメラーゼの大きなフラグメントの組換え型です。
この酵素は、高速増幅と強力な鎖置換機能を備えているため、全ゲノム増幅、多重置換増幅、等温増幅などの核酸増幅法に最適です。
特長
- 鎖置換5′-3′ポリメラーゼ活性を有する
- 5′-3′エキソヌクレアーゼ活性を有さない
- DNA合成は一定の温度で行われる
- 幅広い温度範囲で動作し、最適温度は 65℃
- 幅広いテンプレートで迅速かつ一貫した増幅を実現
- 困難な条件下でも高い収率を実現する高度な 2 部構成バッファー システムが付属
- 30分のプロトコル
- 蛍光色素の有無にかかわらず柔軟なフォーマット
- RNA増幅用の2xミックスおよびデュアル酵素1ステップシステムとしても利用可能
- グリセロールフリー酵素
アプリケーション
- 全ゲノム増幅
- 多重変位増幅
- 等温増幅
- ループ介在等温増幅（LAMP）
- 分子診断
- フィールド診断
IsoFast® Bst Polymerase とは？
IsoFast® Bst Polymerase は大腸菌で発現される組換えタンパク質で、Geobacillus stearothermophilus (以前は Bacillus stearothermophilus として知られていた) DNA ポリメラーゼの大きなフラグメントに相当します。タンパク質のこの部分は DNA の 5′-3′ 合成を触媒し、鎖置換活性を持っていますが、5′-3′ エキソヌクレアーゼ ドメインを含みません[1]。
- Mead DA, McClary JA, Luckey JA, Kostichka AJ, Witney FR, Smith LM. Bst DNA polymerase permits rapid sequence analysis from nanogram amounts of template. Biotechniques. 1991 Jul;11(1):76-8, 80, 82-87.
強力なストランド変位
鎖置換とは、下流で遭遇する二本鎖鋳型 DNA の水素結合を解離する酵素の能力を指し、相補鎖が合成される際に基本的に DNA を解離します。IsoFast® Bst Polymerase は強力な鎖置換活性を示し、全ゲノム増幅、多重置換増幅、等温増幅などの増幅法に適しています。DNA 合成は一定温度で実行されるため、65 °C で反応を実行することをお勧めします。ただし、IsoFast® Bst Polymerase は広い温度範囲 (55 °C ～ 70 °C、参考データ１を参照) で良好に機能し、プライマーのアニーリングと鎖置換を最適化するために幅広い反応条件を提供します。酵素は 80 ºC で熱不活性化されます。
迅速で一貫性のある結果
高速増幅を目的として設計された IsoFast® Bst Polymerase は、さまざまな標的配列にわたって迅速かつ一貫した結果をもたらします (参考データ３を参照)。この酵素には高度な 2 部構成のバッファー システムが搭載されており、困難な条件下でも高い収量とパフォーマンスが保証されます。増幅は、リアルタイム蛍光検出やエンドポイントの視覚化など、さまざまな方法で検出できます。
柔軟なフォーマット
さらなる利便性のために、酵素は別個の蛍光色素（任意の qPCR サーマルサイクラーでのリアルタイム検出を可能にする）とともに利用可能であり、セットアップ時間の短縮を求める場合には 2x ミックス形式で利用できます。酵素は、選択した形式に関係なく、一貫した結果をもたらします（参考データ２を参照）。
この製品はPCRには適していません。
参考データ１：広い温度範囲で活性
M13ゲノムを使用した足場タンパク質遺伝子の等温増幅は、反応を55 ˚C〜70.1 ˚Cの間でインキュベートすることで成功しました。
参考データ２：柔軟なフォーマットにより一貫した結果を得られる
2x IsoFast Bst Mix または 10x IsoFast Bst ポリメラーゼのいずれを使用しても、M13 ゲノムを使用した足場タンパク質遺伝子の等温増幅に違いは観察されませんでした。
参考データ３：さまざまなテンプレートにわたって、迅速かつ一貫した増幅パフォーマンスを実現
IsoFast® Bst Mix、NEB WarmStart® LAMP Kit、およびNEB Bst 2.0 DNAポリメラーゼを使用した3つのターゲットの等温増幅。メーカーのプロトコールに従って反応混合物を設定しました。プライマーミックスは、F3およびB3プライマーの場合は0.2 μM、FIPおよびBIPプライマーの場合は1.6 μM、LoopFおよびLoopBプライマーの場合は0.8 μMで構成されています。総反応容量は25 μLです。示されたコピー数に対応して、テンプレートの 7 段階希釈を使用しました (足場タンパク質遺伝子の場合は 8)。反応は65 °Cで100分間実行されました。BioRad CFX96 Touchを使用して、10秒ごとに蛍光を記録しました。結果が得られるまでの時間は、同じ蛍光しきい値に到達するのに必要な時間です。 IsoFast® Bst Mix は、大手メーカーの製品と比較して、さまざまなテンプレートにわたって高速増幅と一貫したパフォーマンスを示します。
製品仕様
IsoFast® Bst Polymerase
| Component | |
| IsoFast Bst Polymerase 8U/µL 10x IsoFast Buffer A 5x IsoFast Buffer B | |
| 1600 Units | 8000 Units |
| 1 x 200 µL 1 x 500 µL 1 x 1 mL | 1 x 1 mL 2 x 1.25 mL 3 x 1.7 mL |
IsoFast® Bst Polymerase with Dye
| Component | |
| IsoFast Bst Polymerase 8U/µL 10x IsoFast Buffer A 5x IsoFast Buffer B 20x Fluorescent Dye | |
| 1600 Units | 8000 Units |
| 1 x 200 µL 1 x 500 µL 1 x 1 mL 2 x 125 µL | 1 x 1 mL 2 x 1.25 mL 3 x 1.7 mL 2 x 625 µL |
IsoFast® Bst Mix
| Component | |
| 2x IsoFast Bst Mix 20x Fluorescent Dye | |
| 100 Reactions | 500 Reactions |
| 1 x 1.25 mL 1 x 125 µL | 5 x 1.25 mL 1 x 625 µL |
IsoFast® Bst Polymerase (120 U/μL)
| Component | ||
| IsoFast Bst Polymerase (120 U/μL) 10x IsoFast Buffer A 5x IsoFast Buffer B | ||
| 8000 Units | 150 000 Units | 1 500 000 Units |
| 1 x 67 µL 2 x 1.25 mL 3 x 1.7 mL | 1 x 1.25 mL 1 x 47 mL 1 x 94 mL | 1 x 12.5 mL 1 x 470 mL 1 x 940 mL |
Fluorescent Dye
| Component | |
| 20x Fluorescent Dye | |
| 100 Reactions | 500 Reactions |
| 1 x 125 µL | 1 x 625 µL |
| Reaction Volume | Storage | |
| 25 μL | 到着後、製品は -30 °C ～ -20 °C で保管する必要があります。正しく保管すれば、キットは指定された有効期限まで完全な活性を維持します。 | |