DRhp CALUX® (BDS 002)
高性能（hp）バリアントのダイオキシン応答性（DR）CALUX®は、ラット肝腫瘍細胞株H4IIEを使用し、ダイオキシン応答性要素（DRE）に結合したホタルのルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子として組み込んでおり、ダイオキシン（PCDDs）やダイオキシン様化合物、フラン（PCDFs）およびダイオキシン様PCBs（dl-PCBs）の存在を検出します。これらの化合物が細胞内のアリールハイドロカーボン受容体（AhR）に結合すると、リガンド-受容体複合体がDREに結合します。これにより、通常はDRE媒介の転写に関連するタンパク質が発現し、ルシフェラーゼも発現します。適切な基質をルシフェラーゼに追加すると、光が放出されます。生成される光の量は、リガンド特異的受容体活性化の量に比例しており、関連する参照化合物2,3,7,8-TCDDに対してベンチマークされ、毒性等価（TEQ）またはバイオアナリティカル等価（BEQ）として表現されます。標準のDR CALUXラインよりもさらに感度が高く、hpラインは疫学研究のような非常に小さなサイズのサンプルを分析するために特別に設計されています。
| 仕様 | DRhpCALUX® |
| 基底細胞株 | H4IIE |
| 種 | ラット |
| 組織 | 肝細胞癌 |
| 陽性対照 | 2,3,7,8‑TCDD |
| エンドポイント（純粋化合物） | ECまたはPC濃度、最小効果濃度（例：PC10） |
| エンドポイント（混合物） | 毒性当量（pg TEQ/g処理サンプル） |
| テスト期間 | 24時間（インキュベーション時間） |
| 特異性 | 選択的硫酸処理法によって、通常は非常に安定したダイオキシン様化合物のみがAhRに結合します。リガンドの選択は、化合物クラスの選択的処理法および/または代謝モジュールによって行うことができます。 |
| アッセイ干渉 | 非常に経路特異性の高い構成と広範なQA/QCを使用しているため、最小限です。 さらに、混合物中のダイオキシンTEQ評価では、サンプルを硫酸処理で浄化し、その後、dl‑PCBをPCDD/Fから分離する追加手順を実行します。細胞毒性はチェックされますが、まれにしか発生しません。 |
| 感度（LOD/Q） | 通常、pgの範囲（マトリックスとサンプルサイズに依存） |
| 変動制 | …………… |
| Z係数 | …………… |
| マトリックス | あらゆるタイプのサンプル |
| サンプルの体積/質量 | マトリックスおよび所望の（定量限界）LOQに依存 |
| 化合物の量 | 通常は10mg。DMSOで提供される高効力化合物の場合はそれよりずっと低い。 |
| 評価基準 | 関連するアプリケーション/規制に準拠した社内方式。 |
| SOPとガイドライン | BDS 内部および EC 委員会規則 (EU) No 644/2017、委員会規則 (EU) No 771/2017、NL‑SPECIE‑07 (オランダ、Rijkswaterstaat)、 EPA‑4435 (米国)、 JIS ガイドライン 463 (日本)、未利用堆積物の危険破壊防止のためのガイドライン (TA‑2085/2005) (ノルウェー) および EURL‑ECVAM 法 DB‑ALM プロトコル番号 197.: 自動化された CALUX レポーター遺伝子アッセイ手順。 |
| HTSプロトコル | BDS; EURL‑ECVAM DB‑ALMプロトコル番号197を参照: 自動CALUX®レポーター遺伝子アッセイ手順 |
| 主な参考文献 | Budin C, Talia C, Besselink H, Van Vugt-Lussenburg B, Swart K, Jonker L, Middelhof I, Brouwer A, Fowler P, Van der Burg B (2021) Assessment of the effect of maternal smoking on placental and foetal hepatic AhR activity using a CALUX reporter gene assay with improved sensitivity, the DRhp CALUX. Thesis chapter, Vrije Universiteit Amsterdam. |