next-generation qPCR mastermix

Clara® Probe Mix

Clara® Probe Mix は、qPCR のための最新のソリューションです。明確で一貫した結果が得られるこの最先端の qPCR ミックスは、アプリケーションに関係なく、リアルタイム PCR のワークロードを効率化します。

Clara® Probe Mix は、優れた感度で信頼性の高い結果が得られるように設計された次世代の qPCR マスターミックスです。この最適化された 4x 配合は、シングル アッセイとマルチプレックス アッセイの両方で最大の信頼性を実現するように設計されています。診断テストの開発と基礎研究に適しており、すべてのプローブ タイプと qPCR 機器と普遍的に互換性があります。粗唾液または血液サンプルの入力と広範囲の阻害剤耐性については、Clara® Inhibitor-Tolerant Probe Mix をお試しください。

特長

  • 濃縮された 4x ミックスフォーマット、ハイスループット、高度に多重化されたアッセイに最適
  • DNA ターゲットの超高感度検出
  • 低コピーテンプレートの信頼性の高い定量化
  • プライマーダイマー形成の低減により高い特異性を実現
  • 抗体媒介ホット スタート技術
  • 標準および高速サイクル条件のすべてのリアルタイム PCR プラットフォームとの互換性
  • RNA 検出には、Clara® Probe 1-Step Mix を使用してください。

アプリケーション

  • 2ステップRT-qPCR
  • 種の豊富さの定量化
  • ジェノタイピング
  • アレル識別
  • 体外診断キットの開発
  • 単一および多重DNA検出

アプリケーションノート

信頼性の高いプローブqPCR

Clara® Probe Mix は、診断アプリケーションや基礎研究において、最高の感度、信頼性、そして最高の使いやすさを備えた qPCR を可能にするように設計されています。これは、TaqMan、Scorpions、分子ビーコンなど、あらゆる種類のプローブ技術に適したユニバーサル qPCR ミックスです。PCR Biosystems 社独自のホット スタート Taq DNA ポリメラーゼを搭載したこの qPCR ミックスは、別の cDNA 合成キットと併用すると、2 ステップ RT-qPCR プロトコルの DNA 検出に適しています。ただし、日常的な RNA 定量には、より合理化されたワークフローのために、Clara® Probe 1-Step Mix を使用した 1 ステップ プロトコルをお勧めします。

Clara® プローブ ミックスは、遺伝子発現分析、SNP/対立遺伝子検出、遺伝子型判定および対立遺伝子識別研究、種の豊富さの定量化など、あらゆる種類のプローブ ベースの qPCR アプリケーションに使用でき、単一アッセイとマルチプレックス アッセイの両方で高い効率を発揮します。このミックスは汎用性が高く、基礎研究だけでなく体外診断キットの開発にも最適です。

このミックスは、融解曲線分析(ハイブリダイゼーション プローブのみ)にも適しており、パッシブリファレンス色素なし(No-ROX)または参照色素あり(Lo-ROX、Hi-Rox、Separate-ROX、AquaPlex 配合)でご利用いただけます。qPCR 選択ツールを使用して、どの ROX バリアントがお使いの機器と互換性があるかを確認してください。

AquaPlex フォーマットは、赤色 (Cy5、650 nm) チャネルでの検出に適したパッシブ参照色素を使用して設計されており、ROX 検出に通常使用されるチャネルで監視できるプローブ色素の使用を可能にします。これにより、マルチプレックスアッセイでより最適なシグナル生成とより高品質なデータが可能になります。

参考データ:シングルプレックス反応におけるマウス RNA の高感度検出

マウス RNA によるシングルプレックス感度。Cara Probe 1-Step Mix を使用したシングルプレックス設定での一般的なハウスキーピング遺伝子 (βアクチンおよび β -2-ミクログロブリン [B2M]) の増幅。増幅曲線は左のパネルに、効率は右のパネルに示されています。マウスの全 RNA テンプレートの 5 つの連続希釈液を使用しました。それぞれ 50 ng/µL、5 ng/µl、500 pg/µL、50 pg/µL、5 pg/µL に相当します。総反応容量は 20 µL でした。サイクル条件は、52℃ 5 分、95℃ 3 分、および 95℃ 15 秒、60℃ 30 秒の 60 サイクルでした。Clara Probe 1-Step Mix は、テンプレートの濃度が低くても、高い感度と再現性のある増幅を示し、最大限の効率を示します。

参考データ:マルチプレックス設定における信頼性の高いパフォーマンス

Clara Probe 1-Step Mix (ピンク色のバー)、Thermo Fisher SuperScript III Platinum OneStep qRT-PCR Kit (緑色のバー)、Thermo Fisher TaqPath 1-Step Multiplex Mastermix (青色のバー)、および NEB Luna Universal Probe One-Step RY-qPCT Kit (黄色のバー) を使用した、一般的な冬のウイルス (インフルエンザ A、インフルエンザ B、RS ウイルス、および SARS-CoV-2) のマルチプレックス増幅。Ct 値は上のパネルに、効率は下のパネルに示されています。RNA テンプレートの 5 段階希釈液が使用されました。これは、各ウイルスゲノムの 40,000、4,000、400、40、および 4 コピーに相当します。総反応容量は 20 µL でした。サイクル条件は、52℃ 15 分、95℃ 3 分、95℃ 15 秒、60℃ 30 秒の 50 サイクルでした。Clara Probe 1-Step Mix は、マルチプレックス設定で最適な効率で、低コピー数のテンプレートでも高感度で再現性の高い増幅を示し、主要な Probe 1-Step Mix の競合製品と同等かそれ以上です。

参考データ:cDNAターゲットの高感度増幅

Clara® Probe Mix (ピンクの曲線) または TaqMan® Fast Advanced Master Mix (灰色の曲線) を使用した、一般的なハウスキーピング遺伝子 (GAPDH および β-2 ミクログロブリン [B2M]) の増幅。増幅曲線は左のパネルに、効率は右のパネルに示されています。マウス cDNA テンプレートの 3 回 (GAPDH の場合) または 4 回 (B2M の場合) の連続希釈液が使用されました。これは、それぞれ 1 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、または 1 ng/μL、100 pg/μL、10 pg/μL、1 pg/μL に相当します。反応容量は 20 μL でした。サイクル条件は、95 °C 2 分、続いて 95 °C 10 秒、60 °C 30 秒の 50 サイクルでした。

Clara® Probe Mix は TaqMan® Fast Advanced Master Mix よりも優れており、テンプレート濃度が低い場合でも、最適な効率で高い感度と再現性のある増幅を示します。

参考データ:Clara® Probe Mix はcDNA増幅において主要な競合製品より優れています

Clara® Probe Mix (紫)、Luna® universal Probe qPCR Master Mix (黄色)、Takara Premix Ex Taq™ (緑)、および TaqMan® Fast Advanced Master Mix (青) を使用した一般的なハウスキーピング遺伝子 (GAPDH および β-2-Microglobulin [B2M]) の増幅。Ct 値は上部パネルに、効率は下部パネルに示されています。マウス cDNA テンプレートの 3 つの連続希釈液が使用されました。これは、1 ng/μL、100 pg/μL、および 10 pg/μL に相当します。サイクル条件は、95 °C 2 分、続いて 95 °C 10 秒、60 °C 30 秒の 50 サイクルでした。

Clara® Probe Mix は、主要な競合製品よりも低い Ct 値と優れた効率を示しています。

製品仕様

Component
4x Clara Probe Mix Lo-ROX
200 Reactions600 Reactions1000 Reactions10000 Reactions
1 x 1 mL3 x 1 mL5 x 1 mL1 x 50 mL
Component
4x Clara Probe Mix Hi-ROX
200 Reactions600 Reactions1000 Reactions10000 Reactions
1 x 1 mL3 x 1 mL5 x 1 mL1 x 50 mL
Component
4x Clara Probe Mix No-ROX
200 Reactions600 Reactions1000 Reactions10000 Reactions
1 x 1 mL3 x 1 mL5 x 1 mL1 x 50 mL
Component
4x Clara Probe Mix Separate-ROX
50 μΜ ROX Additive
200 Reactions600 Reactions1000 Reactions
1 x 1 mL
1 x 200 μL
3 x 1 mL
1 x 200 μL
5 x 1 mL
1 x 200 μL
Component
4x Clara Probe Mix AquaPlex
200 Reactions600 Reactions1000 Reactions10000 Reactions
1 x 1 mL3 x 1 mL5 x 1 mL1 x 50 mL
Reaction VolumeStorage
20 μL到着後、製品は -30 °C ~ -20 °C で保管する必要があります。正しく保管すれば、キットは指定された有効期限まで完全な活性を維持します。
Instrument Compatibility
この製品は、すべての標準および高速サイクリング qPCR 機器と互換性があります。qPCR 選択ツールを使用して、どの ROX バリアントがお使いの機器と互換性があるかを確認してください。

FAQs

Ct 値がどれくらいの値を超えると結果は信頼できなくなりますか?
Clara® および Clara® Purple ミックスで生成された製品は、消化、クローン化、および配列決定できますか?
ROX は反応に悪影響を及ぼす可能性がありますか?
Clara® Probe Mix および Clara® Probe 1-Step Mix には FAM 色素が含まれていますか?
Clara® Probe Mix および Clara® Probe 1-Step Mix の蛍光が競合他社の製品で得られる蛍光と異なるのは正常ですか?
1x TE (10 mM Tris-HCl / 1 mM EDTA) バッファーでのサンプル DNA の保存は、Clara® Probe Mix および Clara® Probe 1-Step Mix を使用した後続の qPCR と互換性がありますか?
Clara® Probe Mix、Clara® Probe 1-Step Mix、および各 Purple Mix の ROX 濃度はどれくらいですか?
ROX とは何ですか? それは必要ですか?
反応が阻害された場合はどうすればよいですか?
段階希釈により増幅効率が低下した場合はどうすればよいでしょうか?
qPCR に非特異的な生成物が含まれている場合、どのようなトラブルシューティングが推奨されますか?
Ct 値が通常よりも高い場合、どのようなトラブルシューティングが推奨されますか?
マルチプレックスを実行する場合、各プライマーの推奨濃度はどれくらいですか?
競合他社の製品と同じプライマーと PCR 条件を使用しているのに、非特異的な生成物が存在するのはなぜですか?